Solução Tampão E Material Biológico

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA GERAL BIO-611 LABORATÓRIO DE BIOLOGIA CELULAR USO DE SOLUÇÕES TAMPÕES NO PROCESSAMENTO DE MATERIAIS BIOLÓGICOS Míriam Goldfarb Matrícula: 68612 Viçosa, Outubro, 2010 INTRODUÇÃO  Tampões: são substâncias que em solução aquosa dão a estas soluções a propriedade de resistir as variações do seu pH quando às mesmas são adicionadas em quantidades relativamente pequenas de ácidos (H + ) ou base (OH - )  Sistema tampão: ácido fraco e base conjugada  Importância:processos biológicos são dependentes do pH, evitar variações na velocidade da reação Lehninger (2007) e Santos (2003) CAPACIDADE TAMPONANTE DE UMA SOLUÇÃO TAMPÃO  Resistência Tampão efetivo a) pH igual ao pK b) Espécies ácidas e básicas são iguais c) pKa: característica de dissociação da amostra Lehninger (2007) CAPACIDADE TAMPONANTE DE UMA SOLUÇÃO TAMPÃO Lehninger (2007) CAPACIDADE TAMPONANTE DE UMA SOLUÇÃO TAMPÃO  Reação química Íons hidrogênio (H + ) ou Hidroxila (OH-) Espécies básicas e ácidas presentes na amostra Ácido fraco e base fraca Fiorucci et al. (2001) e Lehninger (2007) CAPACIDADE TAMPONANTE DE UMA SOLUÇÃO TAMPÃO  Ação tamponante: Henderson-Hesselbalch Ka = [ H + ] [A- ] [HA] pH = pKa + log [receptor de prótons] (base) [ doador de prótons] (ácido) Lehninger (2007) TAMPÕES BIOLÓGICOS  Primeira linha de defesa do organismo contra as variações do pH interno Fosfatos e bicarbonatos Fosfato H2 PO42- H+ + HPO4  pH 6,4 a 7,4 Fiorucci et al. (2001) e Lehninger (2007) TAMPÕES BIOLÓGICOS  Bicarbontatos: plasma sanguíneo H2 CO3 K1 = H+ + HCO3 [H+ ] [ HCO3 -] [H2 CO3 ]  Concentração de CO2 : acidose e alcalose Lehninger (2007) TAMPÕES BIOLÓGICOS  Enzimas Lehninger (2007) EXPERIMENTAÇÃO  Extração de DNA a) Tris (Hidroximetil) b) RNase, protease, EDTA c) pH = 8,0 Fernandes (2007) EXPERIMENTAÇÃO  Eletroforese a) Evitar grandes oscilações do pH b) Proteínas nativas PAGE c) pI (Pontos isoelétricos) Fernandes (2007) EXPERIMENTAÇÃO  Eletroforese pH = pI  amostra sem movimento pH > pI  caminha em direção ao pólo positivo pH < pI  caminha em direção ao pólo negativo Fernandes (2007) EXPERIMENTAÇÃO Gel de poliacrilamida Gel de agarose Fernandes (2007) CONSIDERAÇÕES FINAIS  Uma solução tampão consiste de um par ácido fraco e base conjugada que resiste a variações no pH quando pequenas quantidades de ácidos e bases são adicionados.  Soluções tampões são importantes para manter o funcionamento dos sistemas biológicos, pois estes são sensíveis a variação do pH, tornando-os dependente do pH OBRIGADA PELA ATENÇÃO!