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Paula Fernandes de Aguiar Departamento de Química Analítica - Instituto de Química – UFRJ : +55(21)2562-7877
Fax: +55(21)2562-7262
:
[email protected]
OBJETIVOS DO TREINAMENTO DISCUTIR OS REQUISITOS EXIGIDOS POR ÓRGÃOS REGULAMENTADORES, ETC SUGERIR COMO A CONFIABILIDADE DOS RESULTADOS PODE SER APRESENTADA COM A AJUDA DOS PARÂMETROS ESTATÍSTICOS APRESENTAR DIFERENÇAS DE ENTENDIMENTO DOS REQUISITOS DE ALGUNS DOCUMENTOS
O QUE É VALIDAÇÃO DE MÉTODO (5.4.5.1) “VALIDAÇÃO É A CONFIRMAÇÃO POR EXAME E FORNECIMENTO DE EVIDÊNCIA OBJETIVA DE QUE OS REQUISITOS ESPECÍFICOS PARA UM DETERMINADO USO PRETENDIDO SÃO ATENDIDOS” ABNT NBR ISO/IEC 17025 : 2005
É O CUMPRIMENTO DOS REQUISITOS
VALIDAÇÃO DE MÉTODO (5.4.5.2) NOTA 2 “CONVÉM QUE A TÉCNICA USADA PARA A DETERMINAÇÃO DO DESEMPENHO DE UM MÉTODO SEJA UMA DAS SEGUINTES OU UMA COMBINAÇÃO DESTAS:” 1. CALIBRAÇÃO COM USO DE PADRÕES DE REFERÊNCIA OU MATERIAL DE REFERÊNCIA 2. COMPARAÇÕES COM RESULTADOS OBTIDOS POR OUTROS MÉTODOS 3. COMPARAÇÕES INTERLABORATORIAIS 4. AVALIAÇÃO SISTEMÁTICA DOS FATORES QUE INFLUENCIAM O RESULTADO 5. AVALIAÇÃO DA INCERTEZA DO RESULTADO COM BASE NO CONHECIMENTO CIENTÍFICO DOS PRINCÍPIOS TEÓRICOS DO MÉTODO E NA EXPERIÊNCIA PRÁTICA ABNT NBR ISO/IEC 17025 : 2005
PORQUE ELA É NECESSÁRIA
PARA DAR CONFIABILIDADE AOS RESULTADOS
QUAIS OS REQUISITOS EXIGIDOS
OS PRECONIZADOS POR DOCUMENTOS PROVENIENTES DE ÓRGÃOS REGULAMENTADORES, ETC
TIPOS DE DOCUMENTOS E NORMAS GERAIS PODEM, EM PRINCÍPIO, SER UTILIZADOS PARA QUALQUER MÉTODO OU TÉCNICA ANALÍTICA ESPECÍFICOS SÃO UTILIZADOS PARA ATENDER A UMA DETERMINADA EXIGÊNCIA OU A UM ORGANISMO CERTIFICADOR, ACREDITADOR OU HABILITADOR
DOCUMENTOS/NORMAS GERAIS USADOS COMO BASE PARA A APRESENTAÇÃO 1. ICH: 2005 VALIDATION OF ANALYTICAL PROCEDURES: TEXT AND METHODOLOGY - Q2(R1) 2. IUPAC: 2002 HARMONISED GUIDELINES FOR SINGLE-LABORATORY VALIDATION OF METHODS OF ANALYSIS 3. INMETRO: 2008 ORIENTAÇÃO SOBRE VALIDAÇÃO DE MÉTODOS ANALÍTICOS – DOQ-GCRE-008 4. VIM: 2008 VOCABULÁRIO INTERNACIONAL DE METROLOGIA
DOCUMENTOS/NORMAS GERAIS USADOS COMO BASE PARA A APRESENTAÇÃO 5. ISO/IEC 17025: 2005 REQUISITOS GERAIS DE COMPETÊNCIA DE LABORATÓRIOS DE ENSAIOS E CALIBRAÇÃO 6. EURACHEM: 1998 THE FITNESS FOR PURPOSE OF ANALYTICAL METHODS. A LABORATORY GUIDE TO METHOD VALIDATION AND RELATED TOPICS 7. ANVISA: 2005 GUIA PARA A QUALIDADE EM QUÍMICA ANALÍTICA. UMA ASSISTÊNCIA À HABILITAÇÃO. SÉRIES TEMÁTICAS 1 LABORATÓRIO
DOCUMENTOS/NORMAS ESPECÍFICOS USADOS COMO BASE PARA A APRESENTAÇÃO 1. RESOLUÇÃO 899 DA ANVISA (AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA): 2003 GUIA PARA VALIDAÇÃO DE MÉTODOS ANALÍTICOS
2. GUIA PARA VALIDAÇÃO DO MAPA (MINISTÉRIO DA AGRICULTURA, PECUÁRIA E ABASTECIMENTO): 2008 GUIA PARA VALIDAÇÃO DE MÉTODOS DE ANALÍTICOS E CONTROLE DE QUALIDADE INTERNA DAS ANÁLISES DE MONITORAMENTO DO PLANO NACIONAL DE RESÍDUOS E CONTAMINANTES – PNCRC ANIMAL
DOCUMENTOS/NORMAS ESPECÍFICOS USADOS COMO BASE PARA A APRESENTAÇÃO
3. DIRETIVA 657 - 96/23/CE: 2002 DESEMPENHO DE MÉTODOS ANALÍTICOS E INTERPRETAÇÃO DE RESULTADOS
4. U.S. PHARMACOPOEIA CONV. (USP) – VOL. 31: 2008 CAPÍTULO 1225 - VALIDAÇÃO
DE QUE PARÂMETROS PRECISO ? DE PARÂMETROS ESTATÍSTICOS MÉDIA, DESVIO PADRÃO, VARIÂNCIA, ETC
DE TESTES ESTATÍSTICOS COCHRAN, HIPÓTESE, ETC
DE MÉTODOS MATEMÁTICOS REGRESSÃO LINEAR, ETC
DE GRÁFICOS DISPERSÃO, RESÍDUOS, ETC
VALIDAÇÃO DO MÉTODO x VALIDAÇÃO DA MEDIÇÃO VALIDAÇÃO É A GARANTIA EXPERIMENTAL DOCUMENTADA DE QUE O MÉTODO É ADEQUADO À FINALIDADE A QUE SE DESTINA IUPAC DIZ QUE A VALIDAÇÃO DEVE SE REFERIR AO SISTEMA ANALÍTICO (QUE COMPREENDE A METODOLOGIA ANALÍTICA, A FAIXA DE TRABALHO PARA O ANALITO DE INTERESSE, A MATRIZ) E NÃO À VALIDAÇÃO DO MÉTODO IUPAC : 2002
EM 2003 AAPS, FIP E ISPE CHEGARAM A UM CONCENSO EM RELAÇÃO AO USO DA PALAVRA VALIDAÇÃO
ELA SERIA RESERVADA APENAS PARA PROCESSOS QUE INCLUÍSSEM MÉTODOS ANALÍTICOS E PROCEDIMENTOS, ALÉM DE DESENVOLVIMENTO DE PROGRAMAS COMPUTACIONAIS, ENQUANTO QUE INSTRUMENTOS SERIAM QUALIFICADOS (Swartz).
AAPS = American Association of Pharmaceutical Chemists FIP = International Pharmaceutical Federation ISPE = International Society for Pharmaceutical Engeneering
QUANDO VALIDAR O MÉTODO
NOVO MÉTODO DESENVOLVIDO ALTERAÇÕES NO MÉTODO MÉTODO MUDA COM O TEMPO TROCA DE LABORATÓRIO / ANALISTA / EQUIPAMENTO EQUIVALÊNCIA ENTRE 2 MÉTODOS
ANALISTA COMPETENTE INSTRUMENTOS FUNCIONANDO ADEQUADAMENTE
INSTRUMENTOS CALIBRADOS ANALISTA TREINADO
PROCESSO DE VALIDAÇÃO ANALISTA COM CONHECIMENTO SOBRE A PARTE QUÍMICA, FÍSICOQUÍMICA, ETC.
INSTRUMENTOS DENTRO DAS ESPECIFICAÇÕES
ANALISTA COM NOÇÕES SOBRE QUALIDADE / ISO
DESENVOLVIMENTO DE MÉTODO OTIMIZAÇÃO
PLANEJAMENTOS DE EXPERIÊNCIA
VALIDAÇÃO
CONTROLE QUALIDADE
APLICAÇÃO REVALIDAÇÃO
VALIDAÇÃO
processo contínuo !!!!!
FASES 1. Planejamento de experiências 2. Execução das experiências 3. Avaliação dos resultados 4. Documentação 5. Aplicação da informação adquirida
PLANEJAMENTO DE EXPERIÊNCIAS
REDUZIRÁ AO MÍNIMO O NÚMERO DE EXPERIMENTOS NECESSÁRIOS
NÍVEL DE QUALIDADE DESEJADO
GRAU DE VALIDAÇÃO NECESSÁRIO
CRITÉRIOS DE DESEMPENHO Os critérios de desempenho variam de acordo com o tipo de método TIPOS DE MÉTODOS
8 QUALITATIVOS 8 SEMI QUANTITATIVOS 8 QUANTITATIVOS
MÉTODOS QUALITATIVOS MÉTODOS PARA OS QUAIS SE DESEJA RESPONDER PERGUNTAS DO TIPO TEM OU NÃO TEM ?
ESTÁ OU NÃO ESTÁ ?
EXEMPLO: HÁ METABÓLITOS DE COCAÍNA NA URINA ANALISADA ?
MÉTODOS SEMI QUANTITATIVOS MÉTODOS PARA OS QUAIS SE DESEJA RESPONDER PERGUNTAS DO TIPO
TEM MAIS DO QUE O VALOR LIMITE ?
ESTÁ ACIMA DO VALOR ACEITÁVEL ? EXEMPLO: A QUANTIDADE DE ÁLCOOL NO SANGUE É MAIOR DO QUE O PERMITIDO POR LEI ?
MÉTODOS QUANTITATIVOS MÉTODOS PARA OS QUAIS SE DESEJA RESPONDER A SEGUINTE PERGUNTA
QUANTO TEM ?
EXEMPLO: QUAL A CONCENTRAÇÃO PIGMENTO NESTA TINTA ?
CRITÉRIOS DE DESEMPENHO SELETIVIDADE/ESPECIFICIDADE SENSIBILIDADE REPETITIVIDADE
PRECISÃO PRECISÃO INTERMEDIÁRIA REPRODUTIBILIDADE
EXATIDÃO
CRITÉRIOS DE DESEMPENHO ROBUSTEZ LINEARIDADE FAIXA DE TRABALHO LIMITE DE DETECÇÃO (LD) LIMITE DE QUANTIFICAÇÃO (LQ)
PLANEJAMENTO DE EXPERIÊNCIAS TIPO DO MÉTODO
NÍVEL VALIDAÇÃO
CRITÉRIOS DE DESEMPENHO SELETIVIDADE
QUALITATIVOS
MUITO PEQUENO
ESPECIFICIDADE LIMITE DETECÇÃO ANTERIORES
SEMI QUANTITATIVOS
MÉDIO
LIMITE QUANTIFICAÇÃO PRECISÃO EXATIDÃO ANTERIORES
QUANTITATIVOS
GRANDE
LINEARIDADE PREC. INTERMEDIÁRIA REPRODUTIBILIDADE
EXECUÇÃO DOS CRITÉRIOS DE DESEMPENHO NENHUMA NORMA/DOCUMENTO/GUIA / DIRETRIZ SE REFERE A UMA ORDEM DE EXECUÇÃO OU, PELO MENOS, DE APRESENTAÇÃO DESTES CRITÉRIOS
NO ENTANTO, CADA CRITÉRIO DE DESEMPENHO TEM COMO OBJETIVO DEMONSTRAR A CAPACIDADE / ADEQUAÇÃO DE UM DETERMINADO MÉTODO EM ATENDER EM UMA EXIGÊNCIA ESPECÍFICA
EXECUÇÃO DAS EXPERIÊNCIAS E AVALIAÇÃO DOS RESULTADOS 1. ESPECIFICIDADE / SELETIVIDADE 2. LINEARIDADE 3. FAIXA DE TRABALHO EQUIPAMENTO
4. SENSIBILIDADE 5. LIMITE DE DETECÇÃO 1. EXATIDÃO AMOSTRA
2. LIMITE DE QUANTIFICAÇÃO
1. COMPARAÇÃO INTERLABORATORIAL 2. PRECISÃO DO MÉTODO
FINAIS
DOCUMENTAÇÃO MÉTODO ANALÍTICO RESULTADOS PROTOCOLO DE VALIDAÇÃO TRATAMENTO DE DADOS AMOSTRAS DE CONTROLE
PORÉM, AS EXIGÊNCIAS DOS DOCUMENTOS MUDAM LIGEIRAMENTE ...
TABELA COMPARATIVA DOS CRITÉRIOS SOLICITADOS PELOS DOCUMENTOS E NORMAS DOCUMENTOS E NORMAS
CRITÉRIOS DE DESEMPENHO F. TRAB
LD
LQ
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
ANVISA
X
X
X
X
X
X
INMETRO
X
X
X
X
X
MAPA
X
X
X
X
657
X
X
X
X
IUPAC
X
X
X
X
X
X
X
X
EURACHEM
X
X
X
X
X
X
X
X
S/E
LIN
ICH
X
USP
SENS
CCa
CCb
EXAT
X
RECU P
REP
P. INT
REPR
ROB
X
X
X
X
X
X
X
X
X
**
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
** = SE HOUVER REPRODUTIBILIDADE A PREC. INTERM. NÃO É NECESSÁRIA
X X
X
X
X
SELETIVIDADE / ESPECIFICIDADE
CAPACIDADE DO MÉTODO EM DETERMINAR COM EXATIDÃO O ANALITO DE INTERESSE NA PRESENÇA DE COMPONENTES PASSÍVEIS DE ESTAREM PRESENTES NA AMOSTRA, COMO IMPUREZAS, PRODUTOS DE DEGRADAÇÃO, EFEITOS DE MATRIZ, ETC.
AMOSTRA ANALITO MATRIZ INTERFERENTES
ESPECÍFICO x SELETIVO AOAC 2 princípios analíticos diferentes FDA método seletivo, específico e exato, ao mesmo tempo
“Estamos verdadeiramente determinando o que pensamos estar determinando ?”
A medida pode ser perturbada por reagentes, efeitos de matriz, analitos que afetam a sensibilidade do detetor, etc.
Acompanhamento cuidadoso do conhecimento disponível
Determinar possíveis fontes de interferência e testá-las
DISPONIBILIDADE * ANALITO * MATRIZ (COM E SEM ANALITO) * PRODUTOS SECUNDÁRIOS * PRODUTOS DE DEGRADAÇÃO * BRANCOS DE REAGENTES
SELETIVIDADE
FAZER A ANÁLISE COM A AMOSTRA E MATERIAIS DE REFERÊNCIA PELO MÉTODO EM ESTUDO E OUTROS MÉTODOS VALIDADOS
ANALISAR AMOSTRAS CONTENDO VÁRIOS INTERFERENTES SUSPEITOS NA PRESENÇA DO ANALITO DE INTERESSE
n≥ 6
ANALITO + MATRIZ
ANALITO
EM AMBOS OS GRUPOS AS AMOSTRAS DEVEM CONTER A MESMA CONCENTRAÇÃO DE ANALITO
MATRIZ SEM ANALITO OU PADRÕES DE REFRÊNCIA ESTIVEREM DISPONÍVEIS
APLICAR TESTE F TESTE t ANÁLISE DOS DESVIOS DOS VALORES DE REFERÊNCIA HIPÓTESE: A MATRIZ NÃO AFETA O SINAL DO ANALITO NA FAIXA DE CONCENTRAÇÃO ESTUDADA, OU NA CONCENTRAÇÃO DE INTERESSE
MATRIZ SEM ANALITO NÃO DISPONÍVEL
MATRIZ COM ANALITO
ANALITO
EM AMBOS OS GRUPOS AS AMOSTRAS DEVEM CONTER A MESMA CONCENTRAÇÃO DE ANALITO ETAPAS
ANÁLISE
1. LANÇAR OS RESULTADOS
SE AS INCLINAÇÕES FOREM IGUAIS, O ÚNICO EFEITO DE MATRIZ PRESENTE É A INTERFERÊNCIA CAUSADA PELO NÍVEL BÁSICO DO ANALITO
EM GRÁFICO 2. COMPARAR AS INCLINAÇÕES DAS RETAS
SIGNIFICÂNCIA QUÍMICA
QUAL O ERRO MÁXIMO NAS ANÁLISES CAUSADO PELA MATRIZ ?
É ELE REALMENTE SIGNIFICATIVO NA PRÁTICA ?
LINEARIDADE
CAPACIDADE DE UMA METODOLOGIA ANALÍTICA EM DEMONSTRAR QUE OS RESULTADOS OBTIDOS SÃO DIRETAMENTE PROPORCIONAIS À CONCENTRAÇÃO DO ANALITO NA AMOSTRA, DENTRO DE UM INTERVALO ESPECIFICADO
LINEARIDADE QUANTIFICAÇÃO
y
Y = f(x)
resíduo
Coeficiente linear Y = a + bx Coeficiente angular (sensibilidade)
x Y = resposta medida (absorbância, altura do pico, vol. De reagente necessário à neutralização, área, etc) X = variável independente (concentração)
LINEARIDADE
UMA RELAÇÃO LINEAR DEVE SER AVALIADA AO LONGO DA FAIXA DE TRABALHO E DEMONSTRADA ATRAVÉS DE DILUIÇÕES DE UMA SOLUÇÃO MÃE PREPARADA COM O ANALITO DE INTERESSE OU DE SOLUÇÕES DESTE ANALITO EM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES. É RECOMENDADO O USO DE, NO MÍNIMO, 5 NÍVEIS DE CONCENTRAÇÃO
PREPARO DAS SOLUÇÕES
OU
N≥5
MATRIZ ISENTA DE ANALITO
CONSTRUÇÃO DA CURVA A CURVA É CONSTRUÍDA ATRAVÉS DE REGRESSÃO LINEAR, SEM FORÇAR SUA PASSAGEM PELA ORIGEM, USANDO-SE O MÉTODO DOS MÍNIMOS QUADRADOS O COEFICIENTE DE CORRELAÇÃO (r) É, EM GERAL, USADO COMO MEDIDA DA LINEARIDADE DA CURVA DE CALIBRAÇÃO
Para HPLC Ensaios biológicos
r ≥ 0,995
Ensaios farmacológicos
r ≥ 0,997
ICH, USP Ensaios em geral
r ≥ 0,9999
GRÁFICO DE RESÍDUOS USADOS PARA VERIFICAR A ADEQUAÇÃO DA CURVA DE CALIBRAÇÃO
Se o gráfico de resíduos não apresentar nenhuma tendência e os arros aleatórios forem pequenos, a calibração pode ser feita (casos D, E e F) A
IDEAL HOMOCEDÁSTICO
C
B
TENDÊNCIA ESTRUTURA
TENDÊNCIA ESTRUTURA
D
E
F
HETEROCEDÁSTICO
HETEROCEDÁSTICO
HETEROCEDÁSTICO
HETEROCEDASTICIDADE
ln (y) = a + b (ln(x))
(y)1/2 = a + b (x)
ln (y) = a + bx
y = a + b(x)
y = a + b (ln(x))
(y) REGRESSÃO LINEAR PONDERADA
1/2
1/2
1/2
= a + bx
COMO EXPRESSAR A LINEARIDADE
HOMOCEDASTICIDADE VERIFICADA ATRAVÉS DO TESTE DE COCHRAN
PARÂMETROS DA RETA COM INTERVALOS DE CONFIANÇA COEFICIENTE DE CORRELAÇÃO DETERMINADOS ATRAVÉS DA REGRESSÃO LINEAR
ADEQUAÇÃO DA CURVA DE CALIBRAÇÃO DETERMINADA ATRAVÉS DO GRÁFICO DE RESÍDUOS
SENSIBILIDADE
MUDANÇA RESPOSTA
MUDANÇA CONCENTRAÇÃO
S = dx / dc MUDANÇA DA RESPOSTA MUDANÇA DA CONCENTRAÇÃO
NATUREZA DO ANALITO
DEPENDE TÉCNICA USADA NA DETERMINAÇÃO
EXPRESSA
COEFICIENTE ANGULAR CURVA DE CALIBRAÇÃO
ATRAVÉS
REGRESSÃO LINEAR OU EXPERIMENTALMENTE
FAIXA DE TRABALHO/INTERVALO
FAIXA DE CONCENTRAÇÃO NA QUAL O ANALITO EM QUESTÃO PODE SER DETERMINADO COM PRECISÃO E TENDÊNCIA ACEITÁVEIS
FAIXA DE TRABALHO
É NORMALMENTE DEFINIDA ATRAVÉS DO ESTUDO DA LINEARIDADE E DEPENDE DA APLICAÇÃO DO MÉTODO
É ESTABELECIDA PELA CONFIRMAÇÃO DE QUE O PROCEDIMENTO ANALÍTICO LEVA A RESULTADOS COM LINEARIDADE, EXATIDÃO E PRECISÃO ACEITÁVEIS AO LONGO DA FAIXA SELECIONADA
LIMITE DE DETECÇÃO (LD) É A MENOR QUANTIDADE DE ANALITO PRESENTE NA AMOSTRA, QUE PODE SER DETECTADA MAS NÃO NECESSARIAMENTE QUANTIFICADA, INDEPENDENTEMENTE DO RUÍDO
AVALIAÇÃO VISUAL
FORMAS DE DETERMINAÇÃO
RELAÇÃO SINAL/RUÍDO
DESVIO PADRÃO E INCLINAÇÃO DA RETA
AVALIAÇÃO VISUAL
ANÁLISE DE VÁRIAS AMOSTRAS COM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DO ANALITO
RELAÇÃO SINAL/RUÍDO
SINAL DAS AMOSTRAS COM BAIXA CONCENTRAÇÃO DO ANALITO
X
SINAL DO BRANCO
PROCEDIMENTOS ANALÍTICOS QUE APRESENTEM LINHA DE BASE
ESTABELECER A MENOR CONCENTRAÇÃO NA QUAL O ANALITO PODE SER DETERMINADO
3:1 RELAÇÕES ACEITÁVEIS
2:1
DESVIO PADRÃO E INCLINAÇÃO DA RETA
LD = 3,3 s / b ESTIMADA ATRAVÉS b = INCLINAÇÃO DA RETA
DA CURVA DE CALIBRAÇÃO
s = DESVIO PADRÃO
DO SINAL DO BRANCO
NA CURVA DE CALIBRAÇÃO
APRESENTAR
O LIMITE DE DETECÇÃO
O MÉTODO USADO PARA DETERMINÁ-LO
VALIDAÇÃO INDEPENDENTE COM AMOSTRAS DE CONCENTRAÇÃO NO LD OU PRÓXIMA OS RESULTADOS MAIS RELEVANTES
LIMITE DE QUANTIFICAÇÃO (LQ)
É A MENOR QUANTIDADE DE ANALITO PRESENTE NA AMOSTRA, QUE PODE SER DETERMINADO COM EXATIDÃO E PRECISÃO ACEITÁVEIS AVALIAÇÃO VISUAL RELAÇÃO SINAL/RUÍDO
FORMAS DE DETERMINAÇÃO
DESVIO PADRÃO E INCLINAÇÃO DA RETA A PARTIR DO LD
AVALIAÇÃO VISUAL
ANÁLISE DE VÁRIAS AMOSTRAS COM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DO ANALITO
RELAÇÃO SINAL/RUÍDO
SINAL DAS AMOSTRAS COM BAIXA CONCENTRAÇÃO DO ANALITO
X
SINAL DO BRANCO
PROCEDIMENTOS ANALÍTICOS QUE APRESENTEM LINHA DE BASE
ESTABELECER A MENOR CONCENTRAÇÃO NA QUAL O ANALITO PODE SER DETERMINADO
RELAÇÃO ACEITÁVEL
10:1
DESVIO PADRÃO E INCLINAÇÃO DA RETA
LQ = 10 s / b ESTIMADA ATRAVÉS b = INCLINAÇÃO DA RETA
DA CURVA DE CALIBRAÇÃO
s = DESVIO PADRÃO
DO SINAL DO BRANCO
NA CURVA DE CALIBRAÇÃO
A PARTIR DO DESVIO PADRÃO DO BRANCO (sb) SUGEREM AOAC
LQ = 10 sb
USP
LQ = 10 sb
EURACHEM
LQ = 5, 6 OU 10 sb
ENSAIO BIOLÓGICOS
10 - 20% VALOR NOMINAL
(CROMATOGRAFIA)
APRESENTAR
O LIMITE DE QUANTIFICAÇÃO
O MÉTODO USADO PARA DETERMINÁ-LO
OS RESULTADOS MAIS RELEVANTES
IMPORTANTE !!!!! O LQ DEVE SER VALIDADO ATRAVÉS DE UM NO. ADEQUADO DE AMOSTRAS COM CONCENTRAÇÕES NO LIMITE OU PRÓXIMAS A ELE
O LQ DEVE SER ESTABELECIDO ATRAVÉS DE UM PADRÃO OU AMOSTRA APROPRIADA
O LQ NÃO DEVE SER DETERMINADO POR EXTRAPOLAÇÃO
EXATIDÃO MRC GRAU DE CONCORDÂNCIA ENTRE O VALOR MEDIDO E O VALOR DE REFERÊNCIA
RESULTADOS DO MÉTODO
MÉTODO REFERÊNCIA
INTERLABORATORIAIS
MATERIAIS CERTIFICADOS
MATERIAIS PADRÃO
EXATIDÃO
A EXATIDÃO É VERIFICADA ATRAVÉS DA AVALIAÇÃO DOS ERROS ALEATÓRIOS E SISTEMÁTICOS
RECUPERAÇÃO (“TRUENESS”)
EXPRESSA EM DESVIOS (“BIAS”)
PRECISÃO
EXPRESSA EM DESVIOS PADRÃO
RECUPERAÇÃO (R)
R (%) = [ (Cf – Cnf) / Ct ] x 100 Cf = CONC. ANALITO NA AMOSTRA FORTIFICADA Cnf = CONC. ANALITO NA AMOSTRA NÃO FORTIFICADA Ct = CONC. ANALITO ADICIONADA À AMOSTRA FORTIFICADA
AS AMOSTRAS DEVEM SER REPRESENTATIVAS DE TODA A FAIXA DE TRABALHO % DE RECUPERAÇÃO ACEITÁVEL
FAIXA DE TRABALHO GRAU DE QUALIDADE EXIGIDO
RECOMENDADO
9 DETERMINAÇÕES CONCENTRAÇÕES AO TRABALHO
EM, NO MÍNIMO, 3 LONGO DA FAIXA DE
APRESENTAR R (%)
OU DIFERENÇA ENTRE A MÉDIA E O VALOR REFERÊNCIA
O MATERIAL DE REFERÊNCIA DEVE SER ADEQUADO AO SEU USO CERTIFICAÇÕES MATERIAL CERTIFICADO TRABALHOS DE LONGA DURAÇÃO MATERIAL ESTÁVEL OU CERTIFICADO TRABALHOS ESPORÁDICOS OU NÃO CRÍTICOS PADRÃO PREPARADO OU FORTIFICADO
EURACHEM
VANTAGENS ESTABILIDADE CONHECIDA HOMOGENEIDADE
PERMITE DETERMINAR DESVIOS
DESVANTAGEM CAROS
PRECISÃO
EXPRESSA O GRAU DE DISPERSÃO DE UMA SÉRIE DE MEDIDAS E DEVE SER CONSIDERADA EM TRÊS NÍVEIS: REPETITIVIDADE, PRECISÃO INTERMEDIÁRIA E REPRODUTIBILIDADE
PRECISÃO EXPRESSA EM TERMOS DE DESVIO PADRÃO (s), DESVIO PADRÃO RELATIVO (sr), INTERVALO DE CONFIANÇA E COEFICIENTE DE VARIAÇÃO
VERIFICADA 3 - 10 REPLICATAS
PRECISÃO
REPETITIVIDADE
PRECISÃO INTERMEDIÁRIA REPRODUTIBILIDADE
REPETITIVIDADE ESTIMATIVA DA PREVISÃO QUANDO A MESMA AMOSTRA É ANALISADA PELO MESMO PROCEDIMENTO
PELO MESMO INSTRUMENTO PELO MESMO ANALISTA
CURTO INTERVALO DE TEMPO
DETERMINADA
9 DETERMINAÇÕES AO LONGO DA FAIXA DE TRABALHO EM, PELO MENOS, 3 CONCENTRAÇÕES
6 DETERMINAÇÕES PARA ÚNICA CONCENTRAÇÃO
UMA
PRECISÃO INTERMEDIÁRIA ESTIMATIVA DA PREVISÃO QUANDO A MESMA AMOSTRA É ANALISADA PELO MESMO PROCEDIMENTO
POR INSTRUMENTOS DIFERENTES
POR ANALISTAS DIFERENTES JAN
FEV
EM DIFERENTES PERÍODOS DE TEMPO
DETERMINADA É FORTEMENTE RECOMENDADO O USO DE PLANEJAMENTOS DE EXPERIÊNCIA PLANEJAMENTO FATORIAL PLANEJAMENTO FATORIAL FRACIONÁRIO PLACKETT-BURMAN “NESTED” TAGUSHI
REPRODUTIBILIDADE/ PRECISÃO INTERLABORATORIAL
A REPRODUTIBILIDADE DEVE SER AVALIADA A PARTIR DE ESTUDOS COLABORATIVOS DE ACORDO COM A NORMA ISO 5725-2
CONDIÇÕES DE MEDIDAS QUE INCLUEM DIFERENTES LABORATÓRIOS, OPERADORES, SISTEMAS DE MEDIÇÃO, E REPLICATAS DE UMA MESMA AMOSTRA
REPRODUTIBILIDADE ESTIMATIVA DA PREVISÃO DO MÉTODO QUANDO A MESMA AMOSTRA É ANALISADA
PELO MESMO PROCEDIMENTO LAB 1
PELA COMPARAÇÃO INTERLABORATORIAL
POR INSTRUMENTOS DIFERENTES POR ANALISTAS DIFERENTES
LAB 2
ROBUSTEZ
MEDIDA DA CAPACIDADE DE PERMANECER INALTERADO COM PEQUENAS VARIAÇÕES NOS PARÂMETROS DO MÉTODO DEVE SER CONSDERADA NA FASE DE DESENVOLVIMENTO DO MÉTODO DEPENDE DO TIPO DE PROCEDIMENTO DEVE MOSTRAR A CONFIABILIDADE DA ANÁLISE EM RELAÇÃO AS VARIAÇÕES A QUE O MÉTODO ESTÁ EXPOSTO SE AS MEDIDAS SÃO SUSCETÍVEIS A VARIAÇÕES NAS CONDIÇÕES ANALÍTICAS, ESTAS DEVEM SER CONTROLADAS
CONSEQÜÊNCIA DA AVALIAÇÃO DA ROBUSTEZ FICAM DETERINADAS AS CONDIÇÕES DOS PARÂMETROS PARA ASSEGURAR QUE A VALIDAÇÃO DO PROCEDIMENTO SEJA MANTIDA, INDEPENDENTEMENTE DE QUEM OU DE ONDE O APLIQUE
ROBUSTEZ
DEVE SER AVALIADA DURANTE A ETAPA DE DESENVOLVIMENTO DO MÉTODO E DEVE MOSTRAR A CONFIABILIDADE DO RESULTADO DAS ANÁLISES EM RELAÇÃO A MUDANÇAS DELIBERADAMENTE CAUSADAS NAS CONDIÇOES DAS VARIÁVEIS DO MÉTODO
COMPARAÇÕES INTERLABORATORIAIS FINALIDADE
GARANTIR (MELHORAR) A QUALIDADE DE SUAS MEDIÇÕES
UTILIZADAS PARA INVESTIGAR DESEMPENHO DE TÉCNICAS ANALÍTICAS DETECTAR ERROS DE TÉCNICAS ANALÍTICAS AVALIAR DESEMPENHO DE LABORATÓRIOS ESTABELECER A EFICIÊNCIA DO MÉTODO CERTIFICAR MATERIAIS DE REFERÊNCIA CORRIGIR TENDÊNCIAS
PROGRAMAS PARA VALIDAÇÃO
PARA USARMOS PROGRAMAS É IMPORTANTE
USAR UM PROGRAMA VALIDADO SABER O QUÊ E COMO O PROGRAMA EXECUTA CADA ETAPA DO PROCESSO DE VALIDAÇÃO TER O PROTOCOLO ESTIPULADO
CONJUNTO DE PROCEDIMENTOS QUE PERMITEM DEMONSTRAR A CONFIABILIDADE DO MÉTODO O PREPARO DE PROTOCOLOS DE VALIDAÇÃO NECESSITA DE
ARTE EXPERIÊNCIA CONHECIMENTO MÉTODO NORMAS
DISCERNIMENTO
DE UMA FORMA GERAL AS NORMAS, GUIAS E DIRETRIZES NÃO FORNECEM MUITA INFORMAÇÃO SOBRE QUAIS E COMO APLICAR TESTES ESTATÍSTICOS PARA OS DIVERSOS CRITÉRIOS DE DESEMPENHO
QUE NORMA/ GUIA/ DIRETRIZ SEGUIR ????
PARA SELECIONAR A FORMA COMO A VALIDAÇÃO DEVERÁ SER EXECUTADA, É NECESSÁRIO VERIFICAR SE ALGUMA NORMA/DIRETRIZ OU GUIA DEVE SER SEGUIDO EM CASO AFIRMATIVO, SEGUIR AS ORIENTAÇÕES DO MESMO CASO CONTRÁRIO, SEGUIR AS RECOMENDAÇÕES DE UM DOCUMENTO REFERÊNCIA, COMO OS CITADOS NESTA APRESENTAÇÃO
O GUIA PARA A QUALIDADE EM QUÍMICA ANALÍTICA DA ANVISA COMENTA:
“... NÃO EXISTE UM ACORDO UNÂNIME SOBRE A INTERPRETAÇÃO DE ALGUNS DOS TERMOS NEM SOBRE AS CONVENÇÕES USADAS NA SUA DETERMINAÇÃO. ASSIM, AO MENCIONAR DADOS DE VALIDAÇÃO, É RECOMENDÁVEL MENCIONAR QUAISQUER CONVENÇÕES ADOTADAS.”
ABNT NBR ISO/IEC 17025 : 2005 VALIDAÇÃO DE MÉTODO (5.4.5.3)
NOTA 3 “A VALIDAÇÃO É UM EQUILÍBRIO ENTRE CUSTOS, RISCOS E POSSIBILIDADES TÉCNICAS. ”
BOM SENSO
REFERÊNCIAS
The fitness for purpose of analytical methods. A laboratory guide to method validation and related topics; EURACHEM, 1998, 1a.edição Guidance for industry; Q2B Validation of analyticl procedures: Methodology; ICH, 1996 Data handling in Science and technology; Handbook of Chemometrics and Qualimetrics, vol 20, Part A, D.L. Massart et al., Elsevier, 1997 Projeto internacional de norma ISO/IEC DIS 17025, Associação brasileira de normas técnicas, 1998
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Validation sufficient for na et al., Mikrochimica Acta,
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REFERÊNCIAS
Guia para validação de métodos analíticos e controle de qualidade interna das análises de monitoramento do plano nacional de resíduos e contaminantes – PNCRC animal: Ministério da agricultura, pecuária e abastecimento (MAPA): 2008 Vocabulário internacional de metrologia (VIM) : 2008 Requisitos gerais de competência de laboratórios de ensaios e calibração - ISO/IEC 17025 : 2005 Practical method validation: validation sufficient for an analysis method, P. Bruce et al., MIKROCHIMICA ACTA, 128(1998)93-106
REFERÊNCIAS
Validação – 2008
U.S. Pharmacopoeia (USP) 32 - CAPÍTULO 1225:
Harmonized guidelines for single laboratory validation of methods of analysis; International union of pure and applied Chemistry (IUPAC) : 2002 Desempenho de métodos analíticos e interpretação de resultados - Decisão da comissão – Diretiva 96/23/CE : 2002 (657) Orientação sobre validação de métodos analíticos – DOQ-GCRE008; Instituto nacional de metrologia, normalização e qualidade industrial – INMETRO: 2008
REFERÊNCIAS
Norma NBR ISO 9000:2000 - Sistemas de gestão da Qualidade – Fundamentos e vocabulário; 2005 Guia para a qualidade em química analítica. Uma assistência à habilitação. Séries temáticas 1 – Laboratório - ANVISA: 2005
